ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਠੋਸ ਪੜਾਅ ਸਿਆਲਿਕ ਐਮਾਈਡ ਟ੍ਰਾਈਗਲਾਈਸਰਾਈਡ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਡੀਐਨਏ ਦੇ 3′ ਸਿਰੇ ਨੂੰ ਇੱਕ ਠੋਸ ਪੜਾਅ ਦੇ ਸਬਸਟਰੇਟ ਉੱਤੇ ਸਥਿਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ ਨੂੰ 3′ ਤੋਂ 5′ ਦਿਸ਼ਾ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਲੋੜੀਂਦੇ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦਾ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਨਹੀਂ ਹੋ ਜਾਂਦਾ। .ਇਹ ਡੀਐਨਏ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦੁਆਰਾ ਡੀਐਨਏ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਤੋਂ ਵੱਖਰਾ ਹੈ।
ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਦੌਰਾਨ ਪਹਿਲੇ ਅਧਾਰ ਦਾ 3′ ਸਿਰਾ CPG 'ਤੇ ਸਥਿਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਅਗਲੇ ਅਧਾਰ ਦਾ 5′-OH di-p-tolyl ਟ੍ਰਾਈਟਿਲ DMT ਨਾਲ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਬੇਸ 'ਤੇ ਅਮੀਨੋ ਗਰੁੱਪ ਬੈਂਜੋਇਕ ਐਸਿਡ ਅਤੇ 3′ ਨਾਲ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। -ਓਐਚ ਨੂੰ ਫਿਰ ਇੱਕ ਅਮੀਨੋ ਫਾਸਫੇਟ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨਾਲ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।1 ਬੇਸ ਦੇ 5 5′-OH ਦਾ 1 ਬੇਸ ਅਤੇ ਅਗਲੇ ਬੇਸ ਦਾ 3′-OH ਇੱਕ ਫਾਸਫਾਈਟ ਟ੍ਰਾਈਗਲਾਈਸਰਾਈਡ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸਨੂੰ ਫਿਰ ਆਇਓਡੀਨ ਨਾਲ ਇੱਕ ਫਾਸਫੇਟ ਟ੍ਰਾਈਗਲਾਈਸਰਾਈਡ ਵਿੱਚ ਆਕਸੀਡਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਦੂਜੇ ਅਧਾਰ 5′-OH ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੈਕਟਰ ਦੁਆਰਾ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਅਗਲੇ ਬੇਸ ਨੂੰ ਜੋੜ ਕੇ ਡਾਇਕਲੋਰੋਸੈਟਿਕ ਐਸਿਡ ਡੀਐਮ ਚੱਕਰ ਜੋੜਦੇ ਹੋਏ, ਅਤੇ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 5′-OH 'ਤੇ ਪ੍ਰੋਟੈਕਟੈਂਟ ਨੂੰ ਇੱਕ ਕਮਜ਼ੋਰ ਐਸਿਡ ਨਾਲ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਟੁਕੜੇ ਨੂੰ ਸੰਘਣੇ ਅਮੋਨੀਅਮ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਡ ਨਾਲ ਠੋਸ ਰਾਲ ਤੋਂ ਡਿਸਕਨੈਕਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਪ੍ਰੋਟੈਕਟੈਂਟ ਨੂੰ ਬੇਸ ਤੋਂ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਹੀਟਿੰਗ ਦੇ ਅਧੀਨ ਕੇਂਦਰਿਤ ਅਮੋਨੀਅਮ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਡ ਦੇ ਨਾਲ, ਅਮੋਨੀਅਮ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਡ ਨੂੰ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਟੁਕੜੇ ਨੂੰ ਵੈਕਿਊਮ ਸੁਕਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਨੂੰ ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਜਾਂ ਪੇਜ ਦੁਆਰਾ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਓਲੀਗੋ ਸਿੰਥੇਸਿਸ ਦੇ ਕਦਮ
ਬੰਦ ਕਰਨਾ
ਦ5 ਸਿਰੇ ਵਾਲੇ DMT ਸੁਰੱਖਿਆ ਸਮੂਹ ਨੂੰ TCA ਹੱਲ ਜੋੜ ਕੇ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ
ਐਕਟੀਵੇਟਰ ਨੂੰ ਓਲੀਗੋਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਮੋਨੋਮਰ ਨਾਲ ਮਿਲਾਉਣਾ ਐਕਟਿਵ ਓਲੀਗੋਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਮੋਨੋਮਰ ਇੰਟਰਮੀਡੀਏਟ ਬਣਾਉਣ ਲਈ।
ਜੋੜੀ
5-ਟਰਮੀਨਲ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਲ ਸਮੂਹ ਇੱਕ ਅਸਥਿਰ ਫਾਸਫਾਈਟ ਟ੍ਰਾਈਗਲਾਈਸਰਾਈਡ ਬਾਂਡ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਐਂਟੀ-ਜਨਰੇਟਿਵ ਸੰਘਣਾਪਣ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਓਲੀਗੋਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਇੰਟਰਮੀਡੀਏਟ ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਕੈਪਿੰਗ
ਇੱਕ ਕੈਪਿੰਗ ਏਜੰਟ ਦਾ ਜੋੜ ਵਾਧੂ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਿਲ ਸਮੂਹਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਐਸੀਟਿਲੇਸ਼ਨ ਕੈਪਿੰਗ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਸੰਘਣਾਪਣ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।
ਆਕਸੀਕਰਨ
ਪਾਣੀ ਵਾਲੇ ਆਇਓਡੀਨ ਘੋਲ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਨਾਲ ਸਥਿਰ ਫਾਸਫੋਰਿਕ ਐਸਿਡ ਟ੍ਰਾਈਗਲਾਈਸਰਾਈਡ ਬਾਂਡ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਆਕਸੀਕਰਨ ਦੁਆਰਾ ਅਸਥਿਰ ਫਾਸਫਾਈਟ ਬਾਂਡਾਂ ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
Cyanoethyl ਕਲੀਵੇਜ
ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਉਤਪਾਦ, ਫਾਸਫੇਟ ਟ੍ਰਾਈਗਲਾਈਸਰਾਈਡ ਬਾਂਡ ਤੋਂ ਸਾਈਨੋਇਥਾਈਲ ਸਮੂਹ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਡੀਈਏ ਘੋਲ ਦੇ ਜੋੜ ਦੇ ਨਾਲ।
ਕਲੀਵਡ ਅਤੇ ਡਿਪ੍ਰੋਟੈਕਸ਼ਨ
ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਠੋਸ ਪੜਾਅ ਕੈਰੀਅਰ ਤੋਂ ਇੱਕ ਸੰਘਣਾ ਅਮੋਨੀਅਮ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਡ ਘੋਲ ਜੋੜ ਕੇ ਕੱਟਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਫਿਰ ਬੇਸਾਂ ਦੇ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਬਾਂਡਾਂ ਤੋਂ ਸੁਰੱਖਿਆ ਸਮੂਹਾਂ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਗਰਮ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਪੋਸਟ ਟਾਈਮ: ਨਵੰਬਰ-21-2022